新型冠狀病毒核酸檢測(cè)，對(duì)于臨床早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早隔離、早治療至關(guān)重要，是有效防控新冠肺炎疫情的關(guān)鍵技術(shù)支撐。那么，核酸檢測(cè)的原理是什么？為什么有些病人沒(méi)有確診但會(huì)被幾次采樣檢測(cè)？我們普通人能否進(jìn)行自測(cè)？針對(duì)這些問(wèn)題，記者采訪了軍事醫(yī)學(xué)研究院副研究員康曉平。
問(wèn)：病毒核酸檢測(cè)試劑盒的原理是什么？
答：由于核酸檢測(cè)技術(shù)成熟、易于實(shí)施，核酸檢測(cè)目前是病毒感染檢測(cè)的最主要方法。
病毒的特點(diǎn)就是形態(tài)非常小，在普通光學(xué)顯微鏡下看不到，肉眼更是無(wú)法直接觀察。但每種病毒都有其獨(dú)特的基因序列，通過(guò)檢測(cè)病人體內(nèi)的病毒核酸，就可判斷病人體內(nèi)是否存在病毒。
現(xiàn)在的病毒核酸檢測(cè)試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測(cè)原理就是以病毒獨(dú)特的基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)，通過(guò)PCR擴(kuò)增，使我們選擇的這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列，都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶基因越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。而沒(méi)有病毒的樣本中，由于沒(méi)有靶基因擴(kuò)增，因此就檢測(cè)不到熒光信號(hào)增強(qiáng)。所以，核酸檢測(cè)，其實(shí)就是通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的累積來(lái)確定樣本中是否有病毒核酸。
問(wèn)：病毒核酸檢測(cè)試劑盒是怎樣研發(fā)出來(lái)的？
答：病毒核酸檢測(cè)試劑盒的一個(gè)優(yōu)勢(shì)就是研發(fā)過(guò)程很快，但前提是必須掌握一定量的病毒基因序列。一旦有了病毒基因序列，通過(guò)生物信息學(xué)分析，就可確定候選的核酸檢測(cè)靶標(biāo)，并進(jìn)行引物和探針的設(shè)計(jì)。核酸檢測(cè)試劑盒的組分中，檢測(cè)引物和探針最為關(guān)鍵。靈敏特異的擴(kuò)增引物，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確與否發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。所以，一般在研發(fā)階段都會(huì)設(shè)計(jì)多對(duì)引物探針，通過(guò)實(shí)驗(yàn)篩選出擴(kuò)增效果最好的引物探針，組裝在病毒核酸檢測(cè)試劑盒中。
問(wèn)：病毒核酸試劑盒在使用中應(yīng)注意哪些問(wèn)題？
答：為了應(yīng)對(duì)防控新冠肺炎疫情，國(guó)家藥監(jiān)局開(kāi)通了綠色通道，診斷試劑的審批非常快，但審批流程并沒(méi)簡(jiǎn)化。每一種檢測(cè)試劑，都必須完成質(zhì)量檢驗(yàn)和臨床樣本考核。用于考核的樣本，對(duì)數(shù)量、類(lèi)型都有明確要求。只有通過(guò)3家以上獨(dú)立醫(yī)學(xué)機(jī)構(gòu)的臨床樣本考核，檢測(cè)準(zhǔn)確性達(dá)到臨床要求，才有可能通過(guò)國(guó)家藥監(jiān)局的審批，獲得診斷試劑生產(chǎn)批號(hào)。
核酸檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確與否，不僅與試劑盒自身的檢測(cè)準(zhǔn)確性有關(guān)，也跟檢測(cè)樣本采集的時(shí)機(jī)和檢測(cè)樣本的類(lèi)型密切相關(guān)。首先，采樣時(shí)機(jī)很重要，如果病人剛吃過(guò)飯、刷過(guò)牙，咽部的病毒被清洗掉了，這時(shí)候去采集，即使是病毒感染陽(yáng)性病人，核酸檢測(cè)也容易出現(xiàn)陰性結(jié)果。所以，有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)護(hù)人員，通常會(huì)要求病人在采集呼吸道樣本前別喝水、別吃飯。
檢測(cè)結(jié)果還跟待測(cè)樣本的類(lèi)型有關(guān)。同一病人同一時(shí)間采集的不同樣本，檢測(cè)結(jié)果差別也會(huì)很大。從疫情出現(xiàn)至今，我直接參與檢測(cè)的臨床樣本有好幾千例，在目前檢測(cè)的新型冠狀病毒感染病人樣本中，通常肺部灌洗液和痰液中的病毒核酸量高于鼻、咽等呼吸道拭子,而呼吸道拭子中的病毒核酸量會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血液。另外，隨著病程的不斷變化，病人體內(nèi)的病毒量也在動(dòng)態(tài)變化。所以確實(shí)會(huì)有不同時(shí)間采樣檢測(cè)結(jié)果不同的情況。
問(wèn)：為什么有些病人沒(méi)有確診但會(huì)被幾次采樣檢測(cè)？
答：在目前的新型冠狀病毒傳染病診療指南中，陽(yáng)性病例的判定是雙靶標(biāo)核酸檢測(cè)陽(yáng)性，如果僅單靶標(biāo)核酸檢測(cè)陽(yáng)性，病人雖不能確定為感染陽(yáng)性，但也不能排除被感染，所以臨床醫(yī)生會(huì)根據(jù)檢測(cè)結(jié)果并結(jié)合病程多次采樣檢測(cè)。有時(shí)，核酸陰性結(jié)果也不能排除被新型冠狀病毒感染，需要排除可能產(chǎn)生假陰性的因素，包括：樣本質(zhì)量差，樣本采集的時(shí)機(jī)不合適，沒(méi)有正確保存、運(yùn)輸和處理樣本，病毒變異，等等。
問(wèn)：普通人能自己使用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)嗎？
答：目前獲得生產(chǎn)批號(hào)的幾款新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑盒都需要專(zhuān)業(yè)的儀器設(shè)備，必須由專(zhuān)業(yè)人員在專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行操作，普通人在家里是無(wú)法使用的。核酸檢測(cè)要取得準(zhǔn)確結(jié)果，規(guī)范操作很關(guān)鍵。通常試劑盒說(shuō)明書(shū)會(huì)講解得很詳細(xì)，包括適用的儀器、試劑的存儲(chǔ)條件、試劑的配置等。專(zhuān)業(yè)人員按照說(shuō)明書(shū)規(guī)范操作，檢測(cè)結(jié)果都是可信的。